A NEW METHOD FOR QUANTITATIVE DETERMINATION OF DEOXYRIBONUCLEASE ACTIVITY USING FLUOROPHORE LABELED OLIGONUCLEOTIDES AS A SUBSTRATE
Abstract
We have developed a new method for quantitative
assessment of the activity of deoxyribonucleases, which
makes it possible to investigate the kinetics of enzymatic reactions.
As a substrate of deoxyribonucleases (DNase) use is
made of a synthetic double- or single-stranded oligonucleotide
of length 25 - 30 b, which carries fl uoretic labels as a reporter
and quencher (emission energy acceptor ). Hydrolysis
of this oligonucleotide of the DNase in any place of its short
sequence leads to dissociation and to appearance of the reporter
signal, which indicates the accumulation of the product
of the enzymatic reaction. This method is used to determine
the activity and the Michaelis constant of DNase from digestive
gland of the pond snail.
assessment of the activity of deoxyribonucleases, which
makes it possible to investigate the kinetics of enzymatic reactions.
As a substrate of deoxyribonucleases (DNase) use is
made of a synthetic double- or single-stranded oligonucleotide
of length 25 - 30 b, which carries fl uoretic labels as a reporter
and quencher (emission energy acceptor ). Hydrolysis
of this oligonucleotide of the DNase in any place of its short
sequence leads to dissociation and to appearance of the reporter
signal, which indicates the accumulation of the product
of the enzymatic reaction. This method is used to determine
the activity and the Michaelis constant of DNase from digestive
gland of the pond snail.
About the Authors
И. Цветков
Московский государственный областной университет
Russian Federation
Russian Federation
Л. Поликарпова
Московский государственный областной университет
Russian Federation
Russian Federation
А. Коничев
Московский государственный областной университет
Russian Federation
Russian Federation
References
1. Бочкова А.П., Филиппович Ю.Б., Коничев А.С. Выделение, очистка и свойства кислой дезок- сирибонуклеазы грены тутового шелкопряда // Биохимия. - 1982. - Т. 47. - Вып. 3. - С. 489-496.
2. Поликарпова Л.В. Константа Михаэлиса кислой фосфатазы как критерий внутривидовой диф- ференциации гидробионтов открытых водоемов Московской области // Сб. науч. тр. Междунар. заоч. науч.-практ. конф. «Наука сегодня: теоре- тические аспекты и практика применения» Там- бов, 28 октября 2011 г. - С. 98-100.
3. Константа Михаэлиса-Ментен кислой фосфа- тазы, как критерий антропогенного влияния на внутривидовую дифференциацию леща (Abramis brama) в Рыбинском водохранилище // Мат. IV Всерос. конф. по водной экотоксикологии, посв. памяти Б.А. Флерова «Антропогенное вли- яние на водные организмы и экосистемы» 24-29 сентября 2011 г. Ч. 1. Борок: Изд-во ИБВВ им. И.Д. Папанина, 2011. - С. 203-207.
4. Соловьев В. Б. Практикум по энзимологии: учеб- но-методическое пособие / Ред. В.Б. Соловьев, М.Т. Генгин. - Пенза: Изд-во ПГПУ им. В.Г. Бе- линского, 2007. - 52 с.
Review
Views:
106
Email this article 