НОВЫЙ МЕТОД КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ДЕЗОКСИРИБОНУКЛЕАЗЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ФЛУОРЕСЦЕНТНО МЕЧЕНЫХ ОЛИГОНУКЛЕОТИДОВ В КАЧЕСТВЕ СУБСТРАТА

Разработан новый метод количественно-
го определения активности дезоксирибонуклеаз, позво-
ляющий исследовать кинетику ферментативной реакции.
В качестве субстрата дезоксирибонуклеаз (ДНКаз) пред-
лагается синтетический двуцепочечный или одноцепо-
чечный олигонуклеотид длиной 25-30 н., несущий флу-
ресцентные метки в качестве сигнального флуорофора и
его тушителя (акцептора энергии испускания). Гидролиз
олигонуклеотида ДНКазой в любом месте его короткой
последовательности приводит к разобщению меток и по-
явлению сигнала флюрофора, который свидетельствует
о накоплении продукта ферментативной реакции. Дан-
ный метод применен для определения активности и кон-
станты Михаэлиса ДНКаз из пищеварительной железы
прудовика обыкновенного.

Дезоксирибонуклеаза, определение активности дезоксирибонуклеазы, субстрат дезоксирибонуклеазы, двуцепочечный олигонуклеотид, флуоресценция, сигнальный краситель и тушитель флуоресценции

1. Бочкова А.П., Филиппович Ю.Б., Коничев А.С. Выделение, очистка и свойства кислой дезок- сирибонуклеазы грены тутового шелкопряда // Биохимия. - 1982. - Т. 47. - Вып. 3. - С. 489-496.

2. Поликарпова Л.В. Константа Михаэлиса кислой фосфатазы как критерий внутривидовой диф- ференциации гидробионтов открытых водоемов Московской области // Сб. науч. тр. Междунар. заоч. науч.-практ. конф. «Наука сегодня: теоре- тические аспекты и практика применения» Там- бов, 28 октября 2011 г. - С. 98-100.

3. Константа Михаэлиса-Ментен кислой фосфа- тазы, как критерий антропогенного влияния на внутривидовую дифференциацию леща (Abramis brama) в Рыбинском водохранилище // Мат. IV Всерос. конф. по водной экотоксикологии, посв. памяти Б.А. Флерова «Антропогенное вли- яние на водные организмы и экосистемы» 24-29 сентября 2011 г. Ч. 1. Борок: Изд-во ИБВВ им. И.Д. Папанина, 2011. - С. 203-207.

4. Соловьев В. Б. Практикум по энзимологии: учеб- но-методическое пособие / Ред. В.Б. Соловьев, М.Т. Генгин. - Пенза: Изд-во ПГПУ им. В.Г. Бе- линского, 2007. - 52 с.