geomgouГеографическая среда и живые системыGeographical Environment and Living Systems2712-76132712-7621Московский государственный областной университетgeomgou-660Research ArticleСтатьиНОВЫЙ МЕТОД КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ДЕЗОКСИРИБОНУКЛЕАЗЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ФЛУОРЕСЦЕНТНО МЕЧЕНЫХ ОЛИГОНУКЛЕОТИДОВ В КАЧЕСТВЕ СУБСТРАТАA NEW METHOD FOR QUANTITATIVE DETERMINATION OF DEOXYRIBONUCLEASE ACTIVITY USING FLUOROPHORE LABELED OLIGONUCLEOTIDES AS A SUBSTRATEЦветковИ. Л.i_tsvetkoff @mail.ruПоликарповаЛ. В.ljudmilapolikarpova@ yandex.ruКоничевА. С.konichev@mail.ruМосковский государственный областной университетRussian Federation201227052022034651Copyright © Цветков И.Л., Поликарпова Л.В., Коничев А.С., 20222022Цветков И.Л., Поликарпова Л.В., Коничев А.С.Цветков И.Л., Поликарпова Л.В., Коничев А.С.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.geoecosreda.ru/jour/article/view/660

Разработан новый метод количественно- го определения активности дезоксирибонуклеаз, позво- ляющий исследовать кинетику ферментативной реакции. В качестве субстрата дезоксирибонуклеаз (ДНКаз) пред- лагается синтетический двуцепочечный или одноцепо- чечный олигонуклеотид длиной 25-30 н., несущий флу- ресцентные метки в качестве сигнального флуорофора и его тушителя (акцептора энергии испускания). Гидролиз олигонуклеотида ДНКазой в любом месте его короткой последовательности приводит к разобщению меток и по- явлению сигнала флюрофора, который свидетельствует о накоплении продукта ферментативной реакции. Дан- ный метод применен для определения активности и кон- станты Михаэлиса ДНКаз из пищеварительной железы прудовика обыкновенного.

We have developed a new method for quantitative assessment of the activity of deoxyribonucleases, which makes it possible to investigate the kinetics of enzymatic reactions. As a substrate of deoxyribonucleases (DNase) use is made of a synthetic double- or single-stranded oligonucleotide of length 25 - 30 b, which carries fl uoretic labels as a reporter and quencher (emission energy acceptor ). Hydrolysis of this oligonucleotide of the DNase in any place of its short sequence leads to dissociation and to appearance of the reporter signal, which indicates the accumulation of the product of the enzymatic reaction. This method is used to determine the activity and the Michaelis constant of DNase from digestive gland of the pond snail.

Дезоксирибонуклеазаопределение активности дезоксирибонуклеазысубстрат дезоксирибонуклеазыдвуцепочечный олигонуклеотидфлуоресценциясигнальный краситель и тушитель флуоресценцииdeoxyribonucleasedetermination of deoxyribonuclease activitysubstrate of the deoxyribonucleasedouble-stranded oligonucleotidesfl uorescencereporter and quencher of fl uorescenceReferencesБочкова А.П., Филиппович Ю.Б., Коничев А.С. Выделение, очистка и свойства кислой дезок- сирибонуклеазы грены тутового шелкопряда // Биохимия. - 1982. - Т. 47. - Вып. 3. - С. 489-496.Бочкова А.П., Филиппович Ю.Б., Коничев А.С. Выделение, очистка и свойства кислой дезок- сирибонуклеазы грены тутового шелкопряда // Биохимия. - 1982. - Т. 47. - Вып. 3. - С. 489-496.Поликарпова Л.В. Константа Михаэлиса кислой фосфатазы как критерий внутривидовой диф- ференциации гидробионтов открытых водоемов Московской области // Сб. науч. тр. Междунар. заоч. науч.-практ. конф. «Наука сегодня: теоре- тические аспекты и практика применения» Там- бов, 28 октября 2011 г. - С. 98-100.Поликарпова Л.В. Константа Михаэлиса кислой фосфатазы как критерий внутривидовой диф- ференциации гидробионтов открытых водоемов Московской области // Сб. науч. тр. Междунар. заоч. науч.-практ. конф. «Наука сегодня: теоре- тические аспекты и практика применения» Там- бов, 28 октября 2011 г. - С. 98-100.Константа Михаэлиса-Ментен кислой фосфа- тазы, как критерий антропогенного влияния на внутривидовую дифференциацию леща (Abramis brama) в Рыбинском водохранилище // Мат. IV Всерос. конф. по водной экотоксикологии, посв. памяти Б.А. Флерова «Антропогенное вли- яние на водные организмы и экосистемы» 24-29 сентября 2011 г. Ч. 1. Борок: Изд-во ИБВВ им. И.Д. Папанина, 2011. - С. 203-207.Константа Михаэлиса-Ментен кислой фосфа- тазы, как критерий антропогенного влияния на внутривидовую дифференциацию леща (Abramis brama) в Рыбинском водохранилище // Мат. IV Всерос. конф. по водной экотоксикологии, посв. памяти Б.А. Флерова «Антропогенное вли- яние на водные организмы и экосистемы» 24-29 сентября 2011 г. Ч. 1. Борок: Изд-во ИБВВ им. И.Д. Папанина, 2011. - С. 203-207.Соловьев В. Б. Практикум по энзимологии: учеб- но-методическое пособие / Ред. В.Б. Соловьев, М.Т. Генгин. - Пенза: Изд-во ПГПУ им. В.Г. Бе- линского, 2007. - 52 с.Соловьев В. Б. Практикум по энзимологии: учеб- но-методическое пособие / Ред. В.Б. Соловьев, М.Т. Генгин. - Пенза: Изд-во ПГПУ им. В.Г. Бе- линского, 2007. - 52 с.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.